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1. 保證所有試驗室材料都無菌
穿插污染是細胞培育的大敵。即使是細微的污染,也可能毀了幾個星期的成果。因培育箱內(nèi)溫暖潮濕,真菌極易成長,因而有必要注意定時清潔。此外,在將培育瓶、移液管及其他的相關物品放入超凈臺之前,應用酒精擦拭干凈,以防止污染。
2. 當心處理您的培育物
細胞培育的脆弱性怎樣著重也不為過。劇烈搖晃,或連續(xù)的溫度動搖可能會對成長產(chǎn)生不利的影響。保證培育箱是水平的,溫度均一,且遠離電動儀器。此外,盡量防止一次處理多個細胞系,由于它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應定時完結STR圖譜剖析,以確認細胞系的身份。
3. 在運用前正確凍結細胞
雖然凍結看起來是個簡單的步驟,但有必要操作妥當,以免傷害細胞。長期暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因而,凍存管應當在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培育基稀釋,以防止DMSO造成直接傷害。
4. 運用對數(shù)成長期的細胞
細胞培育進程共有3個階段:停滯期、對數(shù)期和渠道期,別離代表了低細胞成長、高細胞成長和無細胞成長?;盍Φ募毎墙】档模焖俑盍训?,在對數(shù)期以70-80%的集合度存在。
5. 在傳代之前不要讓細胞*集合
集合度是指貼壁細胞占有培育瓶表面積的份額。*集合意味著100%的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要防止這種狀況,由于它意味著細胞不能持續(xù)成長。不過,燃眉之急是運用活潑成長的細胞。
6. 挑選細胞的培育基開發(fā)戰(zhàn)略
在細胞培育進程中,培育基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的重要因素。有必要針對每種培育物來定制培育基,以優(yōu)化試驗結果。在決定以哪種方法來開發(fā)您的培育基時,您有幾個挑選。