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大鼠胰島素細(xì)胞傳代方法:我們?cè)谑盏郊?xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次?!?/p>
如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞來(lái)源于美國(guó)ScienCell實(shí)驗(yàn)室、美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù),所有細(xì)胞均為原代細(xì)胞,非細(xì)胞系。細(xì)胞經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的控制(從組織來(lái)源、實(shí)驗(yàn)室條件等方面),純度可達(dá)98%。不同的細(xì)胞傳代次數(shù)不一。多數(shù)細(xì)胞種類(lèi)是從胚胎提取,于原代(或二代)凍存在液氮中。大鼠胰島素細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸,客戶(hù)收到細(xì)胞后,從干冰中取出放入液氮中保存,待實(shí)驗(yàn)安排好后,解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)、ScienCell實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞、培養(yǎng)基都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢驗(yàn),分離、配制而成,產(chǎn)品質(zhì)量過(guò)硬。