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ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海研域生物將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)一下,以期給同行帶來—些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
1、超過有效期。試劑盒必須在有效期內(nèi)使用,超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號。
2、試劑盒沒有按規(guī)定進行保存,受高溫影響。
3、試劑、樣品用前未平衡至室溫
4、加入試劑的體積和時間有誤,移液器計量不準(zhǔn),吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。
5、洗板及加樣過程中,酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力,
6、孵育時間及孵育溫度未達到要求,反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。
7、洗板次數(shù)過多,或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求,洗滌沖擊力太大,浸泡時間太長等,
8、顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入。
9、底物作用時間不夠,
10、燕餾水水質(zhì)有問題
ELISA試劑盒靈敏度出現(xiàn)問題相應(yīng)的解決方法
1、實驗前檢查試劑的組分及批號,確認(rèn)試劑未過期,
2、不要將試劑盒長時間置于常溫下,按便用規(guī)定儲藏。
3、試劑、樣品用前平衡至室溫
4、確定所使用的試劑體積正確,加入時間適當(dāng)。校正移液器,移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快,盡量排放完。
5、確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如愛氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗千凈,確認(rèn)配制洗液的純化水達到要求且未受污染。
6、孵育溫度應(yīng)控制在37-38C,孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫。
7、嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù),
8、顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合。
9、準(zhǔn)確定時。
10、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響。