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    兔神經肽Y(NP-Y)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)說明書

    發(fā)布時間: 2010/8/16  點擊次數(shù): 455次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    詳細介紹:

                                              兔神經肽Y(NP-Y)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
                                                               試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。
    藥品名稱:
    通用名:兔神經肽Y(NP-Y)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
    使用目的:
    本試劑盒用于測定兔血清、血漿、或其它相關組織液中神經肽 Y(NP-Y)含量。
    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔神經肽 Y(NP-Y)平。用純化的兔神經肽 Y
    (NP-Y)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入兔神經肽 Y(NP-Y),
    再與HRP標記的神經肽Y(NP-Y)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗
    滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終
    的。顏色的深淺和樣品中的兔神經肽Y(NP-Y)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測
    定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中兔神經肽Y(NP-Y)濃度。
    試劑盒組成
    1 20 倍濃縮洗滌液 50ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(5400ng/L) 0.5ml×1 瓶
    3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
    6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
    標本處理及要求
    1.血清、血漿標本可直接測定;
    2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000轉/分離心10分鐘后,取上清液待測。
    3.組織標本:按相關文獻提取后,取上清液待測。
    4.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    5.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反
    復凍融。
    操作步驟
    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別
    加標準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;再各取 100μl 分
    別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后,在第
    三孔和第四孔中先各取50μl棄掉;再各取 50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、
    第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加
    到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、
    第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,
    混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃 度分別為
    3600ng/L,2400ng/L ,1200ng/L,600ng/L,  300ng/L)。
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
    品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
    4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復 5次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同 3。
    8. 洗滌:操作同 5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
    液后 15分鐘以內進行。
    計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
    OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標
    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
    即為樣品的實際濃度。
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
    控制在5 分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值
    大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
    算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5.嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
    6.本試劑不同批號組分不得混用。
    7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.底物請避光保存。
    檢測范圍:
    200ng/L -4000ng/L
    規(guī)格:
    96 人份/盒
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月

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