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產(chǎn)品展示PRODUCTS
本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床
蘇丹紅檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)
1 蘇丹紅檢測試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測番茄醬、辣椒醬、蛋等樣本中的蘇丹紅(Sudan,SUD),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的蘇丹紅和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗蘇丹紅抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含蘇丹紅含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中蘇丹紅的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~30min~15min
2.3 檢測下限:
番茄汁/番茄醬/辣椒醬………………20ppb
辣椒粉(辣椒面)/飼料………………200ppb
蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋)……………10ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
蘇丹紅…………………………………100%
對位紅…………………………………123%
羅丹明…………………………………8%
2.5 樣本回收率:
番茄汁/番茄醬/辣椒醬…………80% ±10%
辣椒粉(辣椒面)/飼料…………65% ±10%
蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋)………70% ±10%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
5X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:復(fù)溶液
將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 番茄汁/番茄醬/辣椒醬
1)稱取1±0.05g均質(zhì)樣品于離心管中,加入5ml甲醇,振蕩5min,15℃下4000r/min以上離心10min;
2)移取10µl上清液與390µl已稀釋好的復(fù)溶液混勻;
3)取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):200 檢測下限:20ppb
5.3.2 辣椒粉、飼料
1)稱取1±0.05g樣本于離心管中,加入10ml甲醇,震蕩5min,15℃下4000r/min以上離心10min;
2)移取10µl上清液 與1990µl已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶混勻;
3)取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 2000 檢測下限:200ppb
5.3.3 蛋類(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋)
1)用均質(zhì)器低速均質(zhì)蛋類樣本(熟蛋取樣蛋黃,生蛋取樣全蛋);
2)稱取1±0.05g均質(zhì)后蛋類樣本于離心管中,加入5ml甲醇,振蕩5min,15℃下4000r/min以上離心10min;
3)移取10µl上清液 與190µl已稀釋好的復(fù)溶液混勻;
4)取50ul用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):100 檢測下限:10ppb
備注:如樣品嚴(yán)重污染較多雜質(zhì)或殘留物嚴(yán)重超標(biāo),應(yīng)進
一步稀釋后重新分析。
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實驗開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗 滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗 滌:同上
6.6 顯 色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.7 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。