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產(chǎn)品展示PRODUCTS
本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床
氟喹諾酮類檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)
1 氟喹諾酮類檢測試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測蜂蜜、動物組織(雞肉、豬肉、魚、蝦)、牛奶、奶粉和雞蛋等樣本中的氟喹諾酮類藥物(Fluoroquinolones,F(xiàn)QNs),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的氟喹諾酮類藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗氟喹諾酮類藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含氟喹諾酮類藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中氟喹諾酮類藥物的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,45min~15min
2.3 檢測下限:
組織(雞肉、豬肉、魚、蝦)…………0.3ppb
蜂蜜 ……………………………………0.4ppb
牛奶 ……………………………………3ppb
奶粉 ……………………………………6ppb
雞蛋 ……………………………………3ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
恩諾沙星…………………………………100%
諾氟沙星…………………………………100%
雙氟沙星…………………………………84%
氟甲喹……………………………………126%
沙拉沙星…………………………………107%
達(dá)氟沙星…………………………………110%
培氟沙星…………………………………146%
環(huán)丙沙星……………………………110%
依諾沙星………………………………66%
氧氟沙星(消旋體)…………………58%
左氧氟沙星……………………………10%
噁喹酸…………………………………28%
洛美沙星………………………………4%
麻保沙星………………………………4%
2.5 樣本回收率:
組織、蜂蜜、牛奶、奶粉、雞蛋……85%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3 ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb……………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
5X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:無水乙腈、正己烷、濃HCl
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:0.15M鹽酸溶液
取5ml濃鹽酸,加入去離子水中定容到400ml。
配液2:樣本提取液
量取10ml 0.15M鹽酸溶液(配液1)加入到90ml無水乙腈中混合均勻。
配液3:復(fù)溶液
將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 動物組織(雞肉、豬肉、魚、蝦)處理方法
1)稱2.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于50ml離心管中;
2)加入8ml樣本提取液(配液2),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
3)取2ml清澈上層有機相至潔凈干燥的10ml玻璃試管中,50-60℃水浴氮氣吹干;
4)加入1ml正己烷,振蕩2分鐘,再加1ml復(fù)溶液(配液3),振蕩30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;
5)去除上層正己烷,取下層水相50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測下限:0.3ppb
5.3.2 蜂蜜處理方法
1)取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中,加6ml樣本提取液(配液2),振蕩5分鐘,使其充分溶解;
2)加入3ml復(fù)溶液(配液3),加入11ml二氯甲烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘;
3)吸去上層,取下層有機相8ml至干燥溶器中,50-60℃水浴氮氣吹干;
4)用1ml復(fù)溶工作液溶解干燥的殘留物,再加入正己烷1ml混合30秒,室溫3000轉(zhuǎn)/分以上,離心5分鐘;
5)去除上層取下層50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測下限:0.4ppb
5.3.3 牛奶處理方法:
1)取25µl樣本液與475µl復(fù)溶液(配液3)混合,振蕩1分鐘,使其充分溶解;
2)取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):20 檢測下限:3ppb
5.3.4 奶粉處理方法:
1)稱取0.5±0.02g均質(zhì)物至10ml聚苯乙烯離心管中,加入5ml去離子水,振蕩,使其充分溶解;
2)取100µl樣本液與400µl復(fù)溶液(配液3)混合,振蕩1分鐘;
3)取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):50 檢測下限:6ppb
5.3.5 雞蛋處理方法:
1)稱取1.0±0.02g均質(zhì)物至10ml聚苯乙烯離心管中,加入5ml去離子水,振蕩,使其充分溶解;
2)取100µl樣本液與400µl復(fù)溶液(配液3)混合,振蕩1分鐘;
3)取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):30 檢測下限:3ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實驗開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)45分鐘。
6.3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索取)
8 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。