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產(chǎn)品展示PRODUCTS
本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床
豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies virus gE (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 偽狂犬病又名奧耶斯基氏?。ˋujeszky's disease),是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的家畜和多種野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的急性傳染病。該病免疫預(yù)防用的疫苗為gE基因缺失疫苗(也有聯(lián)用gI、TK基因缺失),因此檢測(cè)gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標(biāo)。
本試劑盒用于檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體,可用于區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。
【原 理】
本試劑盒系由預(yù)包被豬偽狂犬病毒重組gE蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中偽狂犬病毒gE蛋白抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有偽狂犬病毒gE蛋白抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)?;用酶?biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有偽狂犬病毒gE蛋白抗體。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格(96T×1) | 規(guī)格(96T×2) |
1. | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標(biāo)記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 抗體工作液 (藍(lán)蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽(yáng)性對(duì)照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對(duì)照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
12. | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
【儲(chǔ)存及有效期】 于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋(如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照≤0.10,陽(yáng)性對(duì)照≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽(yáng)性;樣品A值在0.2到0.38之間為可疑;樣品A值<0.2為陰性。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性表明該豬可能有野毒感染,或是用非gE基因缺失疫苗免疫的。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。